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免疫组化技术

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 病理学是研究疾病发生发展中机体的形态结构、机能和代谢等方面变化及其规律的科学,为诊断和防治疾病提供必要的理论基础,是当前发表学科论文中用到的主要论证方法之一。赫贝拥有专业的病理实验室、一流的病理学设备和强大的技术支撑,提供一系列高水准的病理技术服务,主要服务项目包括:HE染色、特殊染色、免疫组化、免疫荧光、TUNEL、原位杂交、透射电镜、扫描电镜等。

 
部分免疫组化实例:
 


赫贝病理实验样本说明
组织样本
石蜡切片取材要求1)组织固定越新鲜越好,组织离体后,需及时固定。原则上动物死亡后15分钟内完成取材并及时固定组织。
2)组织标本不宜过大。由于所有的固定液都具有穿透力不强、侵透度不大等特点,凡是需要固定的组织,都不应太大太厚。
固定要求1)固定液的选择:10%福尔马林(4%甲醛)或10%中性甲醛是病理切片常规使用的固定液,可以兼顾常规染色和免疫组织化学。
2)固定液的用量:一般加入固定液的量与组织体积比为10:1~20:1。
3)组织固定:固定时间不宜太短,也不宜太长。固定时间太短,会影响组织固定的效果;时间太长,福尔马林会形成聚甲醛,影响核的染色。固定时间主要根据材料块的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定,可以从1小时至数天,通常为数小时至24小时。
切片保存做好的切片,经60℃烤片3-5小时后,可存放于4℃保存;若存放时间较长,最好存于-20℃。
冰冻切片取材要求对于将要做冰冻切片的组织,取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存.
固定要求样本冰冻切片后,应立即将切片放入甲醇、95%酒精、丙酮、4%多聚甲醛等固定液中固定
切片保存固定好的切片,自然风干,密封好可置于-80℃、-20℃保存,但最好尽快用于后续实验。
细胞样本
细胞块石蜡切片对于一些细胞量较多的样品,可离心分离所需细胞,用中性甲醛固定后,制作成琼脂细胞块。然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。
细胞爬片在孔板里做的细胞爬片,爬片取出后,用PBS洗涤2次,用4%多聚甲醛4℃固定15分钟,将表面液体吹干,置于-20℃保存。若短时间内开展实验,可在加固定液后,于4℃冰箱中放置一段时间。
根据研究目的,PBS洗涤可选择不做,如检测凋亡的TUNEL染色时就需避免洗涤,因凋亡的细胞在洗涤过程中有可能脱落。
mRNA原位杂交:经4%多聚甲醛固定,固定液需用DEPC水配制。
细胞涂片细胞学涂片常用的固定液有95%酒精、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等,其中95%酒精较为常用。




 
补充说明:
1)实验常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛,能使大多数抗原保存良好,适用于免疫组织化学。一般认为4%多聚甲醛对检测mRNA的组织固定较为理想,因其既能有效地保存组织中的靶mRNA和组织的形态结构,也可使组织具有一定的通透性。因此做原位杂交时,经常选用4%多聚甲醛做固定液。丙酮的组织穿透性和脱水行更强,常用于冰冻切片及细胞涂片的后固定,保存抗原性较好,平时4℃低温保存备用。若组织样本需做电镜实验,可用2.5%戊二醛来固定。
2)荧光实验中,组织样本最好做成冰冻切片,因石蜡切片有较强的自发荧光,容易干扰实验结果。
3)若客户提供切片,需了解其切片有无防脱处理。除HE实验外,其他病理实验的切片最好是防脱片,以免实验过程中出现掉片。
4)脑组织做冰冻切片时,需先脱水处理,防止生成冰晶。脑组织先于4%多聚甲醛固定24小时(4℃)后,转移至20%蔗糖脱水处理至组织沉底(4℃),再转移至30%蔗糖脱水至沉底(4℃),之后可进行OTC包埋切片。
5)若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验,需进行脱钙处理。若委托我公司进行脱钙处理,则需要延长包埋切片所需时间(延长时间视具体样本而定)。
6)骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样品,实验中出现掉片的几率会较高(即使使用防脱载玻片的情况下)


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