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遗传毒性实验

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Ames实验

Ames试验也叫做鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验,是遗传毒理学研究的重要内容,可以检测药物是否具有致突变、致畸变和致癌变作用,是目前检测基因突变常用的方法之一,可进行药物的遗传毒性评价。


实验原理:鼠伤寒沙门氏菌菌株(TA系列)为组氨酸营养缺陷型突变体,即自身丧失合成组氨酸的能力,因此,在无组氨酸培养基中不能生长。受试物如果为致突变剂,可诱发菌株发生回复突变,重新获得合成组氨酸的能力,从而在缺乏组氨酸的基础培养基中生长。菌落的数量反应了受试物致突变的强弱。


实验菌株:1.TA98;   2.TA100;   3.TA1535;   4.TA1537或TA97或TA97a;   5.TA102或WP2uvrA



染色体畸变实验

染色体畸变包括细胞染色体结构畸变和染色体数目改变,由致断剂等外援因素诱发的染色单体或染色体断裂,进一步造成染色体缺失和重排。常见即便类型包括断裂、断片、缺失、到位、易位等。


实验原理:在体外对哺乳动物细胞进行染色体畸变实验,通过不同浓度受试物在有无体外代谢活化两种状态下对细胞进行染毒,一定时间后用秋水仙素处理,使更多有丝分裂细胞终止在分裂中期,收集细胞进行Giemsa染色,观察染色体结构和数目畸变情况。

至少设置3个受试剂量,还需设置溶剂对照和阳性对照组。


实验细胞株:中国仓鼠肺细胞(CHL)或中国仓鼠卵巢细胞(CHO)


微核试验

微核试验是致断剂或有丝分裂毒物的有效检测方法,在细胞有丝分裂过程中,染色体结构损伤所产生的的染色体段片或因纺锤体功能障碍而形成的滞后染色体,它们均因失去纺锤体的牵引动力而滞留在细胞质中,形成与细胞核染色一致的染色小体称之为微核。


实验原理:最常用的是啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。以受试物处理啮齿类动物,然后处死,取骨髓,制片、固定、染色,于显微镜下计数PCE中的微核。体内实验更能模拟受试物在体内转化过程,因此,在国内外药物、食品及化学品的遗传毒性评价指导中,多将体内微核试验作为遗传毒性评价的实验组合之一。

至少设置3个受试剂量,最高剂量参考1/2 LD50,低毒化合物最高剂量为1000-2000mg/kg/d。还需设置溶剂对照和阳性对照组(常用环磷酰胺)。


实验动物:小鼠、大鼠,每组至少6只。



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