杭州赫贝邀您参加2021细胞产业大会

项目名称

干细胞制剂质量评价

实验科目

实验名称

实验方法

备注

细胞鉴别

细胞形态学检测

显微镜镜检

悬浮情况下，细胞大小均一，形态规则，胞膜完整，透光度好。

表面标志物检测

流式细胞术

CD73、CD90 和 CD105 阳性率不低于 95%；CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR阳性率不高于2%。

染色体核型检测

G带分析法

染色体数量应为46，XX/XY，无染色体缺失、异位和重排现象。

STR分型

PCR扩增后电泳

细胞稳定性评价

细胞存活率检测

台盼蓝染色

活细胞数不得低于90%

细胞周期

MTT试验

端粒酶活性检测

TRAP-PCR银染法

具有端粒酶活性

分化能力评价（细胞制剂有效性）

成脂

条件培养基诱导分化

成骨

条件培养基诱导分化

成软骨

条件培养基诱导分化

微生物学安全性评价

无菌试验

无菌检测法

药典2015版无菌检查法

支原体检测

培养法和指示细胞培养法（DNA染色法）

参照《中华人民共和国药典》现行版版四部通则3301支原体检查法执行

内毒素检测

凝胶法

药典三部(2015版)-通则-1143细菌内毒素检查法

细胞内外源致病因子检测

人源病毒检测

血清 ELISA 检测法

HIV、HBsAg、HCV、TP、CMV-IgM、HTLV、EBV、HCV、HBV、HPV 等(10个)

PCR法

牛源病毒检测

血清 ELISA 检测法

BAV、BPV、BVDV等(3个)

PCR法

猪源病毒检测

血清 ELISA 检测法

猪细小病毒

PCR法

逆转录病毒

试剂盒、电镜、细胞感染

选做

免疫检测

总淋巴及不同淋巴细胞亚群增殖检测

流式细胞术

总淋巴、T细胞、B细胞、NK细胞、CD4、CD8、CD4/CD8

淋巴细胞分泌TNF-α抑制检测

ELISA 检测法

脾脏淋巴细胞分离，激活剂刺激，干细胞共培养，ELISA检测

免疫共刺激分子表达检测

流式细胞术

CD28、ICOS、CTLA-4、B7-1、B7-2、PD-1

炎症因子表达检测

血清 ELISA 检测法

TNF-a、IFN-g、IL-1b、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8

致瘤性检测

体外致瘤性检测

细胞克隆形成试验

连续3周观察至阳性组出现明显克隆

体内致瘤性检测

免疫缺陷动物接种

裸鼠接种，培养45d

培养残留物检测

血清牛蛋白

ELISA法

胰酶

ELISA法

抗生素

培养法

药典推荐

DMSO

LC-MS

项目名称

干细胞制剂生物安全性和有效性评价

试验科目

实验名称

备注

急毒

急性毒性试验

　每组10只

重复毒性

SD大鼠重复毒性试验

　每组10只

病理检查

心肝脾肺肾脑，每组10只

免疫毒性

SD大鼠免疫毒性试验

血常规、血生化、IgG、IgA、IgM

病理HE

胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结

成瘤

动物成瘤性

2个月

病理

致瘤

动物致瘤性

6个月以上

病理

　脏器、脑

促瘤

动物促瘤性

　每组8-10只

病理

致敏

豚鼠致敏

非预期分化

非预期分化

有效性

动物疾病模型制备及验证

根据适应症制定方案

体内分布

体内分部